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      DNA建庫方法大致可分為這幾種類型

      發布時間:2022-02-21      點擊次數:102
         DNA分子的功能是貯存決定物種性狀的幾乎所有蛋白質和RNA分子的全部遺傳信息,對DNA信息的解讀,對于我們研究生命的奧秘、疾病的機理等有著重要的意義。DNA類的文庫主要分為:DNA小片段文庫、DNA大片段文庫、Exon文庫、PCR-Free文庫和單細胞文庫等。DNA建庫方法是分子生物學的實驗原理,其本質就是在待測片段兩端加上接頭的過程。

        DNA小片段文庫是指片段大小在1kb以下的普通DNA文庫(200bp、350bp、500bp等),DNA小片段文庫可用來進行人重測序,動植物、微生物的de novo和重測序,16s rRNA測序,宏基因組測序等項目類型的文庫構建。
        DNA大片段文庫,又稱之為末端配對(mate-paired)文庫,片段長度大于1kb,主要用于動植物,微生物的de novo測序。
        PCR-Free文庫,顧名思義,就是在文庫構建過程中不需要進行PCR的文庫。主要是針對一些特殊樣本,比如GC含量高、PCR擴增困難的樣本和PCR產物。不足之處在于所需的樣本起始量較少。
        Exon文庫:人類外顯子組總共約30 Mb,占人類基因組約1%,外顯子具有高度的保守型,且大部分疾病的致病位點位于外顯子區。外顯子測序是指利用序列捕獲技術將外顯子區域DNA捕捉并富集后進行高通量測序的基因組分析方法。Exon文庫主要用于人全外顯子測序和目標區域測序。
        單細胞DNA文庫:隨著二代測序技術的發展,把一次實驗測許多條DNA序列的這個難題解決之后,一次把一個人的全基因組給測出來,最極限的情況,就是樣本量少到一個細胞,就可以測出整個基因組的序列信息。
       
        目前DNA建庫方法按照接頭連接方式不同可分為五類:
        1、PCR擴增子建庫;
        2、Swift法建庫;
        3、轉座酶法建庫;
        4、TA克隆連接接頭建庫;
        5、平末端連接接頭建庫。

      DNA建庫

       

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