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      NGS工作流程可以分為這三步

      發布時間:2021-11-18      點擊次數:395
        NGS工作流程通常從樣品制備步驟開始,其成功與否對確??煽康臏y序結果至關重要。為了獲得足夠數量和質量的核酸,需要對樣品進行有效和均勻的研磨。機械裂解,更具體地說是珠磨式技術,被認為是樣品研磨均勻化的黃金標準。

        NGS工作流程可以分為這三步:
        文庫制備:為了節省資源,可以將多個文庫混合在一起,在同一運行中進行測序——該過程稱為多重分析。接頭連接過程中,標簽序列(或說“條形碼”)會添加到每個文庫。這些條形碼可以在數據分析過程中區分文庫。這步是為獲取足夠量的/目的的/前期適合上機測序而標準處理DNA。其程序主要有:片段化,連接,擴增。
        測序:在邊合成邊測序(SBS)過程中,化學修飾的核苷酸會通過天然的互補性與DNA模板鏈結合。每個核苷酸都有一個熒光標記和一個可逆終止子,后者可以阻止下一個堿基的摻入。熒光信號可以指示出加入的核苷酸種類,終止子被切割后,下一個堿基才可以繼續結合。其實就是把把采集到的樣品分離提純成需要的基因組DNA,再把這些DNA打成小片段,然后再在這些DNA小片段兩頭接上識別標記和測序接頭,最后再通過基因捕獲技術篩選出目的DNA,根據需求PCR擴增。然后,就可以上機測序了。上機測序的過程就是讀取這些。
        數據分析:可以使用直觀的數據分析應用程序來分析NGS數據,無需進行生物信息學培訓或另外雇傭實驗室人員。這些工具可以進行序列比對、變異檢出、數據可視化或解讀。
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