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      myTXTL® 體外蛋白表達系統的特點

      發布時間:2021-08-27      點擊次數:238
        體外蛋白表達系統 Arbor Biosciences是基于大腸桿菌的體外蛋白表達系統:myTXTL無細胞體外蛋白表達系統(Arbor Biosciences中國代理)
       
        在大腸桿菌蛋白表達實驗中,我們經常會遇到蛋白表達不出來、表達出的蛋白沒有活性、蛋白表達過程中容易形成包涵體等情況,還要分析出現這些情況的原因。
       
        1、目的蛋白不適合在大腸桿菌中表達。包括稀有密碼子、mRNA結構、跨膜區等;
       
        2、表達條件需要進一步優化。比如溫度、分子伴侶、適合的表達宿主等;
       
        3、采用哪種溫和復性條件可以提高蛋白活性,減少包涵體的形成等等。
       
        除此之外,幾乎每出一點差錯就需要重新開始實驗,表達載體的構建、感受態細胞的轉化、陽性克隆的鑒定、培養基的配制、小量誘導摸條件、大量誘導、離心富集細胞、超聲裂解細胞、親和富集與純化。又需要額外花費一周、幾周甚至半年的時間,時間成本高到讓人心煩不已。
       
        現在有一個新技術:myTXTL無細胞蛋白表達技術,這個技術可以替代原核細胞大腸桿菌表達系統,可以解決蛋白表達不出來、表達的蛋白沒有活性、原核蛋白表達產物有包涵體的問題。除此之外,這個技術能夠應用于可溶蛋白和膜蛋白表達、蛋白質功能鑒定、高通量篩選、分子間互作分析。還適用于在大腸桿菌中難以表達的蛋白質、蛋白質分子定向進化、噬菌體生產、基因調控網絡構建、基礎研究(比如,CRISPR系統鑒定)、蛋白-蛋白互作、蛋白-核酸互作、蛋白與小分子的相互作用、酶活檢測等。
       
        myTXTL® 體外蛋白表達系統的特點:
       
        myTXTL® 是一種簡單快速的蛋白質體外表達系統?;虻霓D錄(Transcription, TX)和翻譯(Translation, TL)基于大腸桿菌的內源TXTL機制,在體外建立高效的無細胞反應體系。同時,又保證了T7表達系統的兼容性。
       
        myTXTL®體外蛋白表達系統操作簡單,僅需將線性模板或質粒與myTXTL® Master Mix混勻,目標蛋白在數小時內即可表達出來。不需要轉化、克隆篩選和細胞裂解,避免了包涵體的形成。同時,避免了產物純化過程中目標蛋白的損失。
       
        myTXTL蛋白表達系統一次實驗可對多個樣品進行操作,小的反應體系是12 μl,表達出來的蛋白濃度能達到1 μg/μL,反應體系可等比例擴大。
       
        反應系統里添加了7種大腸桿菌稀有密碼子,去除了密碼子偏好的問題,并且表達的蛋白可正常折疊。
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